上海遠慕生物產(chǎn)品*，主營產(chǎn)品有ELISA試劑盒、細胞株、培養(yǎng)基、標準品、染色液、抗體等，我司與各大高校醫(yī)院均有合作。產(chǎn)品*，質(zhì)量保證，買的多折扣多，另有禮品贈送，訂購！本公司產(chǎn)品僅用于科研使用，不供臨床實驗。

    一、細菌污染
    狀態(tài)：細菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀，根據(jù)感染細菌的不同，可有不同的外形，培養(yǎng)液一般會渾濁變黃，對細胞生長影響明顯。

    預防和補救：
    1.仔細檢查一下器皿的滅菌情況，是否在高壓滅菌時放氣時間和壓力足夠！尤其是和儲存培養(yǎng)液接觸的移液管等物品，連續(xù)兩次污染的話有可能造成儲存液污染，一定要檢查培養(yǎng)液是否存在渾濁現(xiàn)象！

    2.可在培養(yǎng)液或血清中加支原體預防劑。
    3.若細胞一旦污染，建議加支原體清除劑，能清楚常見的革蘭氏陰性和陽性菌。

    二、霉菌及真菌污染
    狀態(tài)：肉眼觀察培養(yǎng)基發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基顏色基本無變化，不渾濁，但是培養(yǎng)基中由絮狀漂浮物，顯微鏡下觀察，若感染真菌可看到分叉細絲狀的結構（不同種類結構不同），若感染霉菌顯微鏡下可看到片狀的結構，不透明，真菌及霉菌對影響細胞的生長影響不大。

    預防和補救：
    1.保證細胞房的干凈整潔，干燥的環(huán)境(潮濕的環(huán)境利于霉菌及真菌的生長)。
    2.控制外來人員進出實驗室。
    3.對實驗室及培養(yǎng)箱進行*消毒。
    4.若細胞非常珍貴，且不易獲得，可以對污染的細胞采取如下操作。

    懸浮細胞：收集細胞并離心，用PBS漂洗，重復此操作數(shù)次。貼壁細胞：用PBS輕輕沖洗細胞，丟棄，重復此操作數(shù)次。

    三、支原體感染
    狀態(tài)：鏡下黑色，多為多形，培養(yǎng)液一般會渾濁，國內(nèi)血清很多沒做支原體陰性檢測，而支原體是牛血清中zui常見的微生物之一。而且它不能用過濾的辦法除去。支原體感染細胞以后，細胞病變不很明顯，只是慢慢死亡。

    預防和補救：
    預防：實驗室新購買的血清及培養(yǎng)基需檢測是否含有支原體，引進的新品種細胞需做支原體檢測，向培養(yǎng)基中添加預防支原體的抗生素。

    補救：向培養(yǎng)基中添加抗生素，（如氧氟沙星10μg/ml、環(huán)丙沙星10μg/ml、卡那霉素20~50μg/ml、四環(huán)素10~50μg/ml、慶大霉素200μg/ml等抗生素），或者向培養(yǎng)基中添加支原體清除劑清除支原體數(shù)天。

    四、黑蛟蟲
    狀態(tài)：可以穿透濾膜，也可以通過空氣傳播，低倍下為黑色點狀，高倍鏡下可看見黑色的小蟲游來游去，培養(yǎng)液不渾濁，一般不會太影響，細胞還可以用。常?？稍谕慌柕难屦B(yǎng)的細胞中發(fā)現(xiàn)類似現(xiàn)象。

    預防和補救：一般黑膠蟲不會影響細胞的生長狀態(tài)，可以嘗試改變培養(yǎng)基的品牌。血清凍融采取逐級凍融的方法。

    五、原蟲感染
    狀態(tài)：培養(yǎng)液可輕微渾濁，顯微鏡下那些細小的點狀物數(shù)量非常多，輕微活動，細胞雖然可用生長但繁殖速度卻明顯減慢，而且細胞狀態(tài)不好，邊緣不清楚，細胞不透亮。他們與細胞可共生，但會與細胞爭奪營養(yǎng)。這種共生是非常普遍的，但他們的數(shù)量小，細胞占優(yōu)勢所以不會影響到細胞的正常生長，只有當他們到達一定的數(shù)量時就會影響到細胞的生長，zui終形成惡性循環(huán)。

    除以上污染源外，配液消毒問題、操作問題也是污染原因之一。關于培養(yǎng)基的無菌狀況，取培養(yǎng)基至培養(yǎng)瓶中（不加細胞），37度試培養(yǎng)一段時間后觀察。如果沒有細菌生長就是操作及細胞培養(yǎng)箱環(huán)境的問題。

    細胞操作及細胞培養(yǎng)箱環(huán)境問題如何解決？
    1、提高細胞操作技巧，禁止交叉使用槍頭，在酒精燈火焰5公分距離內(nèi)操作。
    2、定期對細胞培養(yǎng)箱消毒，培養(yǎng)箱水盤中的水也要定期更換，并使用無菌水。
    3、進入細胞房之前及在無菌操作臺操作細胞實驗之前需使阿用紫外燈照射30分鐘。
    4、每次開培養(yǎng)箱之前需用酒精消毒雙手。
    5、定期對培養(yǎng)箱進行消毒。
    6、配制的培養(yǎng)基需驗證無菌后方可進行細胞培養(yǎng)。